PCR FLUORESCENTE ASSOCIADA À ELETROFORESE CAPILAR COMO FERRAMENTA DE DIAGNÓSTICO DE BACTÉRIAS NO SEMEN
Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 100 a 107 bactérias/mL e submetidas à...
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| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Universidade Federal de Goiás
2013-09-01
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| Series: | Ciência Animal Brasileira |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://revistas.ufg.br/vet/article/view/7638 |
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| author | Francisca E. Ferreira Dias Cáris Marone Nunes Tânia Vasconcelos Cavalcante Andréa A. Pires de Castro Jorge Luis Ferreira José Fernando Garcia |
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Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 100 a 107 bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF–5’gcgctcaggctgccgacgcaa3’ (cromóforo FAM) e BR–5’accagccattgcggtcggta3’ para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 103 bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 105 bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial.
ALAVRAS-CHAVE: Brucella abortus; diagnóstico; eletroforese capilar; PCR fluorescente; sêmen bovino.
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| publishDate | 2013-09-01 |
| publisher | Universidade Federal de Goiás |
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| spelling | doaj.art-1b2f1b75cd4d43a1b7f99cb55ebf8a0f2023-07-01T21:05:13ZengUniversidade Federal de GoiásCiência Animal Brasileira1518-27971809-68912013-09-01143PCR FLUORESCENTE ASSOCIADA À ELETROFORESE CAPILAR COMO FERRAMENTA DE DIAGNÓSTICO DE BACTÉRIAS NO SEMENFrancisca E. Ferreira Dias0Cáris Marone Nunes1Tânia Vasconcelos Cavalcante2Andréa A. Pires de Castro3Jorge Luis Ferreira4José Fernando Garcia5Universidade Federal do TocantinsProfs. Adjunto - Faculdade de Odontologia /Curso de Medicina Veterinária, UNESP Campus-AraçatubaProfs. Adjunto - Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia - UFTDoutoranda da UFT- Pesquisadora da Fundação de Medicina Tropical do TocantinsProfs. Adjunto - Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia - UFTProfs. Adjunto - Faculdade de Odontologia /Curso de Medicina Veterinária, UNESP Campus-Araçatuba Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 100 a 107 bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF–5’gcgctcaggctgccgacgcaa3’ (cromóforo FAM) e BR–5’accagccattgcggtcggta3’ para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 103 bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 105 bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial. ALAVRAS-CHAVE: Brucella abortus; diagnóstico; eletroforese capilar; PCR fluorescente; sêmen bovino. https://revistas.ufg.br/vet/article/view/7638sêmen bovinoBrucella abortusPCR fluorescenteEletroforese capilardiagnóstico. |
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