| Summary: | Com o avanço no entendimento de bioprocessos, houve um significativo aumento
de novas técnicas as interações celulares. Dentre elas, a citometria de fluxo (CF), uma
importante ferramenta para contar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio
líquido em fluxo. Os parâmetros analisados são conteúdos celulares de todas as origens, como
a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, agente etiológico da linfadenite caseosa.
Assim, objetivou-se padronizar técnicas, através da Citometria de fluxo para avaliar a
contagem absoluta e os aspectos fisiológicos de C. pseudotuberculosis e células fagocitárias
murinas. Foi cultivado o C. pseudotuberculosis em meio BHI –Tween 80 0,5%, seguido da
marcação deste microrganismo com corantes fluorescentes, em diferentes períodos e
diferentes estados fisiológicos ao longo do seu crescimento. No ensaio de fagocitose
utilizaram-se células do peritônio de murinos de duas linhagens após peritonite induzida por
Tioglicolato de Sódio. Após a adesão celular, foi feito o desafio com bactérias coradas e após
1h 30 min as células aderentes foram tripsinizadas, lavadas e centrifugadas para o ensaio por
CF. Foi observado um período de crescimento similar a uma curva padrão de crescimento
microbiano, além de permitir a distinção entres diferentes estados fisiológicos. Os dados
obtidos na citometria evidenciam populações de células fagocíticas contendo bactérias no
citoplasma. Observou-se uma população de baixa complexidade interna, similar à
apresentada por linfócitos, e uma população com complexidade interna moderada similar a
apresentada por células de origem monocítica. A técnica de citometria de fluxo com a
marcação por florescência foi eficaz para a avaliação do crescimento e viabilidade de C.
pseudotuberculosis, bem como da interação das células bacterianas com as células
fagocitárias peritoneais murinas. A CF constitui-se, portanto, numa técnica eficiente para a
avaliação da curva de crescimento desta bactéria, permitindo a distinção dos diferentes
estados fisiológicos, inclusive podendo indicar um mecanismo de escape à fagocitose.
|
|---|