Técnica alternativa para fechamento de placas de microtécnica em exames de histocompatibilidade HLA
O Sistema HLA é composto por glicoproteínas integrais de membrana: as moléculas HLA A, B, C, DR, DO e DP. Entre as principais aplicações desse sistema encontram-se os estudos para os transplantes de medula óssea. Um importante avanço metodológico no estudo do sistema HLA surgiu com a descrição de u...
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| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Instituto Nacional de Câncer (INCA)
2022-10-01
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| Series: | Revista Brasileira de Cancerologia |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://rbc.inca.gov.br/index.php/revista/article/view/2958 |
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| author | Sérgio Ré de Paiva Tádia Maria Cordeiro de Paiva Luciane Faria de Souza Pontes Fábio Cupertino Morínigo |
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O Sistema HLA é composto por glicoproteínas integrais de membrana: as moléculas HLA A, B, C, DR, DO e DP. Entre as principais aplicações desse sistema encontram-se os estudos para os transplantes de medula óssea. Um importante avanço metodológico no estudo do sistema HLA surgiu com a descrição de um teste de microlinfocitotoxicidade: uma microtécnica empregada até os dias de hoje, na qual células portadoras dos HLA são utilizadas como alvo em reações de citotoxicidade desenvolvidas em microplacas específicas (placas Terasaki). A etapa final do método consiste na cobertura da placa com lamínula de vidro e leitura ao microscópio óptico de luz invertida. O presente trabalho apresenta uma técnica alternativa de fechamento da placa Terasaki que permite a leitura em microscópio óptico comum. Resume-se na colocação de um preparado tipo "gel" (Gelatina de Kaiser modificada) sobre a placa Terasaki ao término da metodologia usual, permitindo a inversão da mesma para leitura em microscópio óptico comum. O procedimento técnico de sorologia HLA é desenvolvido normalmente, e após coloração com eosina e fixação com formol neutro, a gelatina é dispensada na placa vagarosamente, devendo cobri-la homogeneamente. A preparação é deixada então à temperatura ambiente até que atinja o estado "gel". A leitura é feita em microscópio óptico comum, colocando-se a placa tampada com o fundo voltado para cima. Foram realizados 20 testes preliminares utilizando-se em paralelo a técnica convencional de fechamento e a técnica alternativa. A técnica mostrou-se econômica e de fácil execução, e a reprodutibilidade das leituras quando comparamos os dois métodos mostrou-se satisfatória. Nas placas em que se utilizou a Gelatina, novas leituras foram realizadas quinzenalmente durante 6 meses, e não se verificaram quaisquer alterações na morfologia celular nem no padrão de leitura.
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| publishDate | 2022-10-01 |
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| spelling | doaj.art-5324bcb5895f47e5bc74699de1f453da2024-03-03T03:54:13ZengInstituto Nacional de Câncer (INCA)Revista Brasileira de Cancerologia2176-97452022-10-0141410.32635/2176-9745.RBC.1995v41n4.2958Técnica alternativa para fechamento de placas de microtécnica em exames de histocompatibilidade HLASérgio Ré de Paiva0Tádia Maria Cordeiro de Paiva1Luciane Faria de Souza Pontes2Fábio Cupertino Morínigo3Divisão de Imunogenética e Transplante de Órgãos do Instituto Nacional do Câncer (DITRAN/INCA). Rio de Janeiro (RJ), BrasilBióloga da Fundação Ary Frauzino (FAF). Rio de Janeiro (RJ), BrasilDepartamento de Histologia e Embriologia. lnstituto de Biologia. Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ), Rio de Janeiro (RJ), Brasil.Divisão de Imunogenética e Transplante de Órgãos do Instituto Nacional do Câncer (DITRAN/INCA). Rio de Janeiro (RJ), Brasil O Sistema HLA é composto por glicoproteínas integrais de membrana: as moléculas HLA A, B, C, DR, DO e DP. Entre as principais aplicações desse sistema encontram-se os estudos para os transplantes de medula óssea. Um importante avanço metodológico no estudo do sistema HLA surgiu com a descrição de um teste de microlinfocitotoxicidade: uma microtécnica empregada até os dias de hoje, na qual células portadoras dos HLA são utilizadas como alvo em reações de citotoxicidade desenvolvidas em microplacas específicas (placas Terasaki). A etapa final do método consiste na cobertura da placa com lamínula de vidro e leitura ao microscópio óptico de luz invertida. O presente trabalho apresenta uma técnica alternativa de fechamento da placa Terasaki que permite a leitura em microscópio óptico comum. Resume-se na colocação de um preparado tipo "gel" (Gelatina de Kaiser modificada) sobre a placa Terasaki ao término da metodologia usual, permitindo a inversão da mesma para leitura em microscópio óptico comum. O procedimento técnico de sorologia HLA é desenvolvido normalmente, e após coloração com eosina e fixação com formol neutro, a gelatina é dispensada na placa vagarosamente, devendo cobri-la homogeneamente. A preparação é deixada então à temperatura ambiente até que atinja o estado "gel". A leitura é feita em microscópio óptico comum, colocando-se a placa tampada com o fundo voltado para cima. Foram realizados 20 testes preliminares utilizando-se em paralelo a técnica convencional de fechamento e a técnica alternativa. A técnica mostrou-se econômica e de fácil execução, e a reprodutibilidade das leituras quando comparamos os dois métodos mostrou-se satisfatória. Nas placas em que se utilizou a Gelatina, novas leituras foram realizadas quinzenalmente durante 6 meses, e não se verificaram quaisquer alterações na morfologia celular nem no padrão de leitura. https://rbc.inca.gov.br/index.php/revista/article/view/2958Sistema HLASorologia HLAMicrolinfocitotoxicidadeTipagem HLA |
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