Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformis
Objetivo. Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Materiales y métodos. Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una pro...
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| Format: | Article |
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| Published: |
Instituto Nacional de Salud
2022-03-01
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| Series: | Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública |
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| Online Access: | https://rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/9292 |
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| author | Astrid Flores-Nuñez Gladis Ventura Henri Bailon Adolfo Marcelo Gustavo Sandoval Carlos Padilla-Rojas |
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| description | Objetivo. Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Materiales y métodos. Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una proteína de B. bacilliformis con potencial antigénico e inmunogénico. El gen de la proteína seleccionada se clonó en Escherichia coli TOP10 y se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. La proteína recombinante fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se optimizaron las condiciones de inducción. Por último, se purificó con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) y se realizó un ensayo de Western Blot. Resultados: In silico, la proteína seleccionada fue LptD por estar localizada en la membrana externa y ser antigénica e inmunogénica. Las condiciones optimizadas para la inducción del dexr_LptD fueron 0,5 mM IPTG, 16 h, medio TB (Terrific Broth), etanol al 3% (v/v), 28 ºC, OD600: 1-1,5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes a pequeña escala y se obtuvo 2,6 μg/mL de dexr_LptD parcialmente purificada. El ensayo de Western Blot mostró una reacción positiva entre los sueros provenientes de pacientes con la enfermedad de Carrión y dexr_LptD, ello evidencia la antigenicidad del dexr_LptD. Conclusiones. El dexr_LptD muestra antigenicidad in silico y a nivel serológico, estos resultados son base para posteriores estudios sobre candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión. |
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| publishDate | 2022-03-01 |
| publisher | Instituto Nacional de Salud |
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| series | Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública |
| spelling | doaj.art-7fc291da967b48a3b028fe897bc739ca2022-12-22T00:40:29ZspaInstituto Nacional de SaludRevista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública1726-46341726-46422022-03-01391152310.17843/rpmesp.2022.391.92922671Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformisAstrid Flores-Nuñez0Gladis Ventura1Henri Bailon2Adolfo Marcelo3Gustavo Sandoval4Carlos Padilla-Rojas5Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú. Grupo de Investigación en Bioinformática y Biología Estructural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. BiólogoLaboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú. BiólogoLaboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú. magíster en Bioquímica y Biología MolecularLaboratorio de Referencia Nacional de Metaxénicas Virales, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú. BiólogoGrupo de Investigación en Bioinformática y Biología Estructural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. magíster en Biología MolecularLaboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú. BiólogoObjetivo. Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Materiales y métodos. Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una proteína de B. bacilliformis con potencial antigénico e inmunogénico. El gen de la proteína seleccionada se clonó en Escherichia coli TOP10 y se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. La proteína recombinante fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se optimizaron las condiciones de inducción. Por último, se purificó con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) y se realizó un ensayo de Western Blot. Resultados: In silico, la proteína seleccionada fue LptD por estar localizada en la membrana externa y ser antigénica e inmunogénica. Las condiciones optimizadas para la inducción del dexr_LptD fueron 0,5 mM IPTG, 16 h, medio TB (Terrific Broth), etanol al 3% (v/v), 28 ºC, OD600: 1-1,5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes a pequeña escala y se obtuvo 2,6 μg/mL de dexr_LptD parcialmente purificada. El ensayo de Western Blot mostró una reacción positiva entre los sueros provenientes de pacientes con la enfermedad de Carrión y dexr_LptD, ello evidencia la antigenicidad del dexr_LptD. Conclusiones. El dexr_LptD muestra antigenicidad in silico y a nivel serológico, estos resultados son base para posteriores estudios sobre candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión.https://rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/9292infecciones por bartonellaproteína lptdbartonella bacilliformisproteínas recombinantesantigenicidad vacunal, biología computacional |
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