طراحی و ساخت واکسن خوراکی مبتنی بر لاکتوکوکوس لاکتیس نوترکیب بیان کننده‌ی پروتئین سیتوپلاسمی لومازین سنتاز علیه بروسلا آبورتوس
مقاله پژوهشیمقدمه: واکسیناسیون، یکی از مؤثرترین و اقتصادی‌ترین روش‌ها برای کنترل بروسلوز می‌باشد. هدف از این پژوهش، ایجاد باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس نوترکیب بیان‌کننده پروتئین سیتوپلاسمی لومازین سنتاز (Brucella lumazine synthase) BLS بروسلا آبورتوس می‌باشد.روش‌ها: در این مطالعه، وکتور مورد نظر به همرا...
| Main Authors: | , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | fas |
| Published: |
Isfahan University of Medical Sciences
2023-11-01
|
| Series: | مجله دانشکده پزشکی اصفهان |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://jims.mui.ac.ir/article_31096_87bbf41f3a51f6720277d73b81bbfafa.pdf |
| Summary: | مقاله پژوهشیمقدمه: واکسیناسیون، یکی از مؤثرترین و اقتصادی‌ترین روش‌ها برای کنترل بروسلوز می‌باشد. هدف از این پژوهش، ایجاد باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس نوترکیب بیان‌کننده پروتئین سیتوپلاسمی لومازین سنتاز (Brucella lumazine synthase) BLS بروسلا آبورتوس می‌باشد.روش‌ها: در این مطالعه، وکتور مورد نظر به همراه ژن و سیگنال پپتید (pNZ8148-Usp45-BLS) طراحی و سنتز گردید. به منظور تأیید صحت کلونینگ از روش واکشن زنجیره‌ای پلیمراز (Polymerase chain reaction) PCR، هضم آنزیمی و توالی‌یابی استفاده شد. سپس وکتور بیانی نوترکیب به باکتری اشریشیاکلی سویه Top10 F ترانسفورم شد. باکتری‌های ترانسفورم شده که بر روی پلیت آگار حاوی کلرامفنیکل رشد کرده بودند، انتخاب شده و با استفاده از کیت استخراج پلاسمید ستونی، استخراج انجام شد. با استفاده از تکنیک الکتروپوریشن، وکتور نوترکیب درون باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شد. به منظور تأیید ترانسفورماسیون از تکنیک ژل الکتروفورز عمودی (Sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis = SDS-PAGE) و (Reverse transcription polymerase chain reaction) RT-PCR استفاده شد.یافته‌ها: هضم آنزیم، PCR و توالی‌یابی به منظور تأیید کلونینگ ژن BLS در وکتور pNZ8148 انجام شد. مشاهده‌ی قطعه‌ی ژنیBLS با طولی برابر 477 جفت باز و قطعه پلاسمید pNZ8148 - Usp45 فاقد قطعه‌ی ژنی BLS با طول 2997 جفت باز،کلون‌سازی قطعه‌ی ژنی BLS تأیید شد. نتایج توالی‌یابی توسط شرکت Generay ارسال شد. همچنین در بررسی انجام شده توسط دستگاه نانودراپ غلظت پلاسمید استخراج شده ng/µl848/9 و درجه‌ی خلوص 2/07 برآورد شد. نتایج حاصل از RT-PCR حاکی از موفقیت در ترانسفورماسیون ژن BLS بروسلا آبورتوس در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس بود. نتایج حاصل از SDS-PAGE حاکی از وجود تک باند 18 کیلودالتونی پروتئین BLS بود.نتیجه‌گیری: پژوهش حاضر نشان داد که ژن BLS باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pNZ8148-Usp45-BLS به روش الکتروپوریشن، بیان می‌شود. |
|---|---|
| ISSN: | 1027-7595 1735-854X |