Evaluasi Validitas Human Cortisol Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Kit dan Waktu Sentrifugasi Sampel Darah untuk Pengukuran Konsentrasi Hormon Kortisol pada Kambing Kacang - Gholib Gholib; Sri Wahyuni; Rahma Melinda; Muslim Akmal (Jurnal Agripet, 2021)
ABSTRAK. Penggunaan human cortisol enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit untuk pengukuran hormon kortisol pada hewan dan keterlambatan waktu sentrifugasi sampel darah untuk analisis hormon perlu dievaluasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi validitas human cortisol ELISA kit (EIA-1887, DRG Instruments GmbH, Germany) untuk pengukuran konsentrasi kortisol dan menguji pengaruh keterlambatan waktu sentrifugasi sampel darah terhadap stabilitas konsentrasi kortisol pada kambing kacang. Sampel darah dikoleksi dari delapan ekor kambing kacang. Uji validitas kit EIA-1887 dilakukan secara: a) analitik (uji parallelism, akurasi, dan presisi), dan b) biologis (pengukuran kortisol sebelum dan setelah transportasi). Uji keterlambatan waktu sentrifugasi terhadap stabilitas konsentrasi kortisol dilakukan dengan 5 perlakuan yaitu disentrifugasi kurang dari 1 jam (P1/kontrol), 6 jam (P6), 12 jam (P12), 18 jam (P18),dan 24 jam (P24) setelah darah dikoleksi. Data uji parallelism dianalisis dengan uji persamaan kemiringan, uji presisi dihitung % CV (coefficient variation) intra-assay dan inter-assay, uji akurasi dihitung % recovery, uji T untuk validasi biologis, dan uji ragam (One Way Anova) untuk pengaruh waktu sentrifugasi. Hasil uji parallelism menunjukkan kurva sampel kambing kacang sejajar/parallel dengan kurva standar kortisol. Akurasi kit EIA-1887 adalah 103,43±7,85%, dan % CV intra-assay dan inter-assay adalah 10%. Konsentrasi kortisol setelah transportasi secara signifikan lebih tinggi daripada sebelum transportasi (p0,05). Adanya penurunan secara nyata konsentrasi kortisol pada darah yang disentrifugasi 24 jam (P24) setelah koleksi (p0,05). Kesimpulan, human cortisol ELISA kit (EIA-1887) memiliki validitas yang baik secara analitik dan biologis untuk digunakan dalam pengukuran konsentrasi kortisol pada kambing kacang. Keterlambatan waktu sentrifugasi selama 24 jam berpengaruh terhadap konsentrasi kortisol.