Клонирование и экспрессия гена маннаназы Thermothielavioides terrestris в Komagataella phaffii - Задорожный А.B.; Павлова Е.Ю.; Ушаков В.С.; Богачева Н.В; Шляхтун В.Н.; Розанов А.С.; Воскобоев M.E.; Коржук А.В.; Новикова Д.С.; Банникова С.В.; Мещерякова И.А; Васильева А.Р.; et al. (Письма в Вавиловский журнал генетики и селекции, 2022)
Для экспрессии в дрожжах Komagataella phaffii клонирован ген маннаназы Thermothielavioides terrestris в состав плазмиды pPZL. Проведены трансформация полученных конструкций в клетки Escherichia coli XLblue и ПЦР-скрининг клонов, несущих конструкции с геном маннаназы Thermothielavioides terrestris. Полученная конструкция секвенирована и ей трансформированы дрожжи штамма K. phaffii T07. Показано, что в четвертую хромосому генома специально отобранного клона № 42 в район AOX1- промотора внедрена последовательность гена mannanase_Thermothielavioides_terrestris. Ген устойчивости к антибиотику зеоци- ну в отобранном клоне № 42 отсутствовал. Таким образом, клон № 42 может быть применен в промышленности в качестве штамма-продуцента фермента маннаназы. Произведена наработка фермента и изучены его свойства. Разработана методика очистки фермента для получения ферментных препаратов. Оптимум рН β-маннаназы составляет 2.5–6.0. Полученный ферментный препарат термостабилен, проявляет высокую активность до 80 °C. Температурный оптимум – 50 и 70 °C.