Prueba de microneutralización para detección la de anticuerpos contra el virus dengue serotipo 2
Objetivo: Estandarizar la prueba de microneutralización (MNT) para detección de anticuerpos neutralizantes contra el virus dengue serotipo 2 (DENV-2) en la línea celular Vero-76. Materiales y métodos: Se evaluaron diferentes concentraciones celulares (0,6 x105 cel/mL, 0,9 x105 cel/mL, 1,2 x105 cel...
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| Published: |
Colegio Médico del Perú
2023-08-01
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| Series: | Acta Médica Peruana |
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| author | Lucas Augusto Sevilla Drozdek Egma Mayta Huatuco Enrique Mamani Zapana Nora Reyes Puma Karla Vásquez Cajachahua Bernardo Quispe Bravo Joe Hermosilla Jara Adrián Quintana Bedoya Juan Sulca Herencia |
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Objetivo: Estandarizar la prueba de microneutralización (MNT) para detección de anticuerpos neutralizantes contra el virus dengue serotipo 2 (DENV-2) en la línea celular Vero-76. Materiales y métodos: Se evaluaron diferentes concentraciones celulares (0,6 x105 cel/mL, 0,9 x105 cel/mL, 1,2 x105 cel/mL), porcentajes de 2%, 3% y 4% de suero bovino fetal (SBF), número de pasajes del stock de virus y los días de incubación. La semilla viral se confirmó por RT-qPCR. El DENV-2 se propagó realizando 5 pasajes en células Vero-76, seguidamente se tituló el virus en placas de 96 pozos y se evaluaron 2 métodos de infección celular: monocapa y células en suspensión, además se determinó el día óptimo de coloración de las células. Obtenidos los resultados, se procesaron mediante MNT para DENV-2 las siguientes muestras: 5 sueros negativos a DENV-2 y YFV, 5 sueros negativos a DENV-2 y positivos a YFV y 5 sueros positivos a DENV-2 seleccionados mediante la prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) Resultados: El método óptimo para MNT utilizó células en suspensión (0,9 x 105 cel/mL), 2% de SBF y semilla viral pasaje 5. La mínima dilución capaz de diferenciar una muestra positiva a DENV-2 fue 1:40 y el tiempo de incubación para la MNT para DENV-2 fue de 10 días. Conclusión: La MNT permite detectar anticuerpos neutralizantes IgG contra DENV-2, brinda resultados fiables y se puede analizar un mayor número de muestras con ahorro de materiales.
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| spelling | doaj.art-cb0ce314d5bc45a695f36bb92a1be0d02023-08-03T06:00:58ZengColegio Médico del PerúActa Médica Peruana1018-88001728-59172023-08-0140210.35663/amp.2023.402.2538Prueba de microneutralización para detección la de anticuerpos contra el virus dengue serotipo 2Lucas Augusto Sevilla Drozdek0Egma Mayta Huatuco1Enrique Mamani Zapana2Nora Reyes Puma3Karla Vásquez Cajachahua4Bernardo Quispe Bravo5Joe Hermosilla Jara6Adrián Quintana Bedoya7Juan Sulca Herencia8Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, PerúLaboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú; Instituto Nacional Daniel Alcides Carrión, Lima, Perú.Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.Laboratorio de Virología Clínica y Molecular. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Objetivo: Estandarizar la prueba de microneutralización (MNT) para detección de anticuerpos neutralizantes contra el virus dengue serotipo 2 (DENV-2) en la línea celular Vero-76. Materiales y métodos: Se evaluaron diferentes concentraciones celulares (0,6 x105 cel/mL, 0,9 x105 cel/mL, 1,2 x105 cel/mL), porcentajes de 2%, 3% y 4% de suero bovino fetal (SBF), número de pasajes del stock de virus y los días de incubación. La semilla viral se confirmó por RT-qPCR. El DENV-2 se propagó realizando 5 pasajes en células Vero-76, seguidamente se tituló el virus en placas de 96 pozos y se evaluaron 2 métodos de infección celular: monocapa y células en suspensión, además se determinó el día óptimo de coloración de las células. Obtenidos los resultados, se procesaron mediante MNT para DENV-2 las siguientes muestras: 5 sueros negativos a DENV-2 y YFV, 5 sueros negativos a DENV-2 y positivos a YFV y 5 sueros positivos a DENV-2 seleccionados mediante la prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) Resultados: El método óptimo para MNT utilizó células en suspensión (0,9 x 105 cel/mL), 2% de SBF y semilla viral pasaje 5. La mínima dilución capaz de diferenciar una muestra positiva a DENV-2 fue 1:40 y el tiempo de incubación para la MNT para DENV-2 fue de 10 días. Conclusión: La MNT permite detectar anticuerpos neutralizantes IgG contra DENV-2, brinda resultados fiables y se puede analizar un mayor número de muestras con ahorro de materiales. https://amp.cmp.org.pe/index.php/AMP/article/view/2538DengueSerotipoNeutralizaciónOptimizaciónInmunoglobulina |
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