Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors
O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), p...
| Main Authors: | , , , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT)
2009-12-01
|
| Series: | Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0037-86822009000600008 |
| _version_ | 1817978653162602496 |
|---|---|
| author | Daniela Maira Cardozo Gláucia Andréia Guelsin Samaia Laface Clementino Fabiano Cavalcante de Melo Marco Antônio Braga Cleonice de Souza Ricardo Alberto Moliterno Jeane Eliete Laguila Visentainer |
| author_facet | Daniela Maira Cardozo Gláucia Andréia Guelsin Samaia Laface Clementino Fabiano Cavalcante de Melo Marco Antônio Braga Cleonice de Souza Ricardo Alberto Moliterno Jeane Eliete Laguila Visentainer |
| author_sort | Daniela Maira Cardozo |
| collection | DOAJ |
| description | O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concentrações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR.<br>The objective of this study was to standardize a method for extracting high-quality DNA from samples of coagulated blood. Forty-eight samples of human coagulated blood were used for DNA extraction by means of the EZ-DNA® commercial kit (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), the Neoscience® column kit (One Lambda Inc., San Diego, CA, USA) and a modified salting-out method. Only the salting-out method was able to extract high concentrations of DNA (mean, 180 ng/¼l), which were measured using the Qubit® fluorescence detector (Invitrogen, USA). This method enabled amplification of HLA (human leukocyte antigen) genes using the Luminex PCR-SSO (polymerase chain reaction - sequence-specific oligonucleotide) technology, which demands good quality DNA, and amplification of KIR (killer-cell immunoglobulin-like receptor) genes using an in-house PCR-SSP (polymerase chain reaction - sequence-specific primer) technique, which demands a specific concentration of DNA (10 ng/¼l). We concluded that the modified salting-out technique was very efficient, simple and fast for DNA extraction from human coagulated blood samples, with the aim of genotyping the HLA and KIR genes. |
| first_indexed | 2024-04-13T22:32:51Z |
| format | Article |
| id | doaj.art-da2f57a467d54a499dbfefd727520a67 |
| institution | Directory Open Access Journal |
| issn | 0037-8682 1678-9849 |
| language | English |
| last_indexed | 2024-04-13T22:32:51Z |
| publishDate | 2009-12-01 |
| publisher | Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT) |
| record_format | Article |
| series | Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical |
| spelling | doaj.art-da2f57a467d54a499dbfefd727520a672022-12-22T02:26:53ZengSociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT)Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical0037-86821678-98492009-12-0142665165610.1590/S0037-86822009000600008Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptorsDaniela Maira CardozoGláucia Andréia GuelsinSamaia Laface ClementinoFabiano Cavalcante de MeloMarco Antônio BragaCleonice de SouzaRicardo Alberto MoliternoJeane Eliete Laguila VisentainerO objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concentrações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR.<br>The objective of this study was to standardize a method for extracting high-quality DNA from samples of coagulated blood. Forty-eight samples of human coagulated blood were used for DNA extraction by means of the EZ-DNA® commercial kit (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), the Neoscience® column kit (One Lambda Inc., San Diego, CA, USA) and a modified salting-out method. Only the salting-out method was able to extract high concentrations of DNA (mean, 180 ng/¼l), which were measured using the Qubit® fluorescence detector (Invitrogen, USA). This method enabled amplification of HLA (human leukocyte antigen) genes using the Luminex PCR-SSO (polymerase chain reaction - sequence-specific oligonucleotide) technology, which demands good quality DNA, and amplification of KIR (killer-cell immunoglobulin-like receptor) genes using an in-house PCR-SSP (polymerase chain reaction - sequence-specific primer) technique, which demands a specific concentration of DNA (10 ng/¼l). We concluded that the modified salting-out technique was very efficient, simple and fast for DNA extraction from human coagulated blood samples, with the aim of genotyping the HLA and KIR genes.http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0037-86822009000600008Extração de DNASangue coaguladoBiologia molecularPadronizaçãoDNA extractionCoagulated bloodMolecular biologyStandardization |
| spellingShingle | Daniela Maira Cardozo Gláucia Andréia Guelsin Samaia Laface Clementino Fabiano Cavalcante de Melo Marco Antônio Braga Cleonice de Souza Ricardo Alberto Moliterno Jeane Eliete Laguila Visentainer Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical Extração de DNA Sangue coagulado Biologia molecular Padronização DNA extraction Coagulated blood Molecular biology Standardization |
| title | Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors |
| title_full | Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors |
| title_fullStr | Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors |
| title_full_unstemmed | Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors |
| title_short | Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors |
| title_sort | extracao de dna a partir de sangue humano coagulado para aplicacao nas tecnicas de genotipagem de antigenos leucocitarios humanos e de receptores semelhantes a imunoglobulina dna extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin like receptors |
| topic | Extração de DNA Sangue coagulado Biologia molecular Padronização DNA extraction Coagulated blood Molecular biology Standardization |
| url | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0037-86822009000600008 |
| work_keys_str_mv | AT danielamairacardozo extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT glauciaandreiaguelsin extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT samaialafaceclementino extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT fabianocavalcantedemelo extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT marcoantoniobraga extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT cleonicedesouza extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT ricardoalbertomoliterno extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun AT jeaneelietelaguilavisentainer extracaodednaapartirdesanguehumanocoaguladoparaaplicacaonastecnicasdegenotipagemdeantigenosleucocitarioshumanosedereceptoressemelhantesaimunoglobulinadnaextractionfromcoagulatedhumanbloodforapplicationingenotypingtechniquesforhumanleukocyteantigenandimmun |