DESENVOLVIMENTO DE UM NOVO SISTEMA BASEADO EM QPCR UTILIZANDO OS ALVOS MOLECULARES CYP141 E IS6110 PARA DETECÇÃO DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Introdução/objetivos: A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), que continua sendo um grave problema de saúde pública mundial. O diagnóstico convencional da TB é realizado pela análise dos critérios clínico-epidemiológicos do paciente, associado...
| Main Authors: | , , , , , , , , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Elsevier
2023-10-01
|
| Series: | Brazilian Journal of Infectious Diseases |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1413867023008814 |
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|---|---|
| author | Wlisses Henrique Veloso de Carvalho Silva Rayssa Maria Pastick Jares da Costa Giovanna Gabriela Pedroza Rodrigues Danielle Martiniano da Silva Rodrigues Renata Inglez de Souza Tejo Kessia Kelly Batista da Silva Josefa Nayara dos Santos Nascimento Milena Brandão de Lima Nathyeli Oliveira do Nascimento Jéssica Lopes Teixeira Bárbara Wanessa Delgado Abrantes Haiana Charifker Schindler Lilian Maria Lapa Montenegro |
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| author_sort | Wlisses Henrique Veloso de Carvalho Silva |
| collection | DOAJ |
| description | Introdução/objetivos: A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), que continua sendo um grave problema de saúde pública mundial. O diagnóstico convencional da TB é realizado pela análise dos critérios clínico-epidemiológicos do paciente, associados aos exames laboratoriais. Porém, ele apresenta inúmeras dificuldades, principalmente para os casos de TB extrapulmonar (TBEP), que podem vir acompanhados de outras doenças, apresentando sintomatologia inespecífica, e com amostras biológicas paucibacilares, o que compromete a sensibilidade dos métodos convencionais. Atualmente, o Xpert MTB/RIF é o único teste molecular recomendado pela OMS para o diagnóstico de TB. Porém, o Xpert MTB/RIF apresenta-se como uma técnica de alto custo, geralmente pode processar apenas quatro amostras simultaneamente e ainda não é eficaz para amostras TBEP. Nesse cenário, a PCR em tempo real (qPCR) in house é uma técnica rápida, precisa, de menor custo comparada ao Xpert MTB/RIF, e tem se mostrado promissora para o diagnóstico de TB. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo desenvolver um sistema de qPCR in house utilizando os alvos moleculares IS6110-CyP141 para detecção de Mtb no diagnóstico laboratorial da TB. Métodos: Os primers e sondas dos genes alvo foram desenhados e analisados pela ferramenta OligoAnalyzer. Extração de DNA de cepas de referência H37Ra e H37Rv de Mtb foi realizada, seguida de diluição seriada 10 vezes com oito pontos de concentração de DNA (10ηg/µl – 1fg/µl) para e construção da curva padrão e determinar o limite de detecção. Os ensaios de qPCR in house foram realizados em triplicatas. Resultados: O limite de detecção do novo sistema de qPCR in house foi 100fg/µl (Ct 36) e 10fg/µl (Ct 34) para os genes CyP141 e IS6110, respectivamente, evidenciando uma maior sensibilidade para o alvo IS6110. As curvas de amplificação também foram menores para o gene IS6110 (Ct = 12 – 34) do que para o gene CyP141 (Ct = 17 – 36). Conclusão: Diante dos resultados preliminares, o novo sistema de qPCR in house (IS6110-CyP141) demonstrou bom desempenho de detecção da Mtb, possibilitando o diagnóstico precoce da doença nos pacientes com suspeita e início adequado do tratamento anti-TB. Além disso, a implementação do teste molecular in house usado concomitantemente com outras técnicas irá auxiliar os serviços de saúde do SUS no diagnóstico e controle da TB no país. |
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| issn | 1413-8670 |
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| publishDate | 2023-10-01 |
| publisher | Elsevier |
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| series | Brazilian Journal of Infectious Diseases |
| spelling | doaj.art-e68ed731aff44d6986dafabe1f634fb42023-11-16T06:09:18ZengElsevierBrazilian Journal of Infectious Diseases1413-86702023-10-0127103621DESENVOLVIMENTO DE UM NOVO SISTEMA BASEADO EM QPCR UTILIZANDO OS ALVOS MOLECULARES CYP141 E IS6110 PARA DETECÇÃO DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSISWlisses Henrique Veloso de Carvalho Silva0Rayssa Maria Pastick Jares da Costa1Giovanna Gabriela Pedroza Rodrigues2Danielle Martiniano da Silva Rodrigues3Renata Inglez de Souza Tejo4Kessia Kelly Batista da Silva5Josefa Nayara dos Santos Nascimento6Milena Brandão de Lima7Nathyeli Oliveira do Nascimento8Jéssica Lopes Teixeira9Bárbara Wanessa Delgado Abrantes10Haiana Charifker Schindler11Lilian Maria Lapa Montenegro12Instituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, Brasil; Corresponding author.Instituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilUniversidade Federal de Pernambuco (UFPE), Recife, PE, BrasilUniversidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), Recife, PE, BrasilUniversidade Federal de Pernambuco (UFPE), Recife, PE, BrasilUniversidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), Recife, PE, BrasilCentro Universitário Estácio do Recife, Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilInstituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ), Recife, PE, BrasilIntrodução/objetivos: A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), que continua sendo um grave problema de saúde pública mundial. O diagnóstico convencional da TB é realizado pela análise dos critérios clínico-epidemiológicos do paciente, associados aos exames laboratoriais. Porém, ele apresenta inúmeras dificuldades, principalmente para os casos de TB extrapulmonar (TBEP), que podem vir acompanhados de outras doenças, apresentando sintomatologia inespecífica, e com amostras biológicas paucibacilares, o que compromete a sensibilidade dos métodos convencionais. Atualmente, o Xpert MTB/RIF é o único teste molecular recomendado pela OMS para o diagnóstico de TB. Porém, o Xpert MTB/RIF apresenta-se como uma técnica de alto custo, geralmente pode processar apenas quatro amostras simultaneamente e ainda não é eficaz para amostras TBEP. Nesse cenário, a PCR em tempo real (qPCR) in house é uma técnica rápida, precisa, de menor custo comparada ao Xpert MTB/RIF, e tem se mostrado promissora para o diagnóstico de TB. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo desenvolver um sistema de qPCR in house utilizando os alvos moleculares IS6110-CyP141 para detecção de Mtb no diagnóstico laboratorial da TB. Métodos: Os primers e sondas dos genes alvo foram desenhados e analisados pela ferramenta OligoAnalyzer. Extração de DNA de cepas de referência H37Ra e H37Rv de Mtb foi realizada, seguida de diluição seriada 10 vezes com oito pontos de concentração de DNA (10ηg/µl – 1fg/µl) para e construção da curva padrão e determinar o limite de detecção. Os ensaios de qPCR in house foram realizados em triplicatas. Resultados: O limite de detecção do novo sistema de qPCR in house foi 100fg/µl (Ct 36) e 10fg/µl (Ct 34) para os genes CyP141 e IS6110, respectivamente, evidenciando uma maior sensibilidade para o alvo IS6110. As curvas de amplificação também foram menores para o gene IS6110 (Ct = 12 – 34) do que para o gene CyP141 (Ct = 17 – 36). Conclusão: Diante dos resultados preliminares, o novo sistema de qPCR in house (IS6110-CyP141) demonstrou bom desempenho de detecção da Mtb, possibilitando o diagnóstico precoce da doença nos pacientes com suspeita e início adequado do tratamento anti-TB. Além disso, a implementação do teste molecular in house usado concomitantemente com outras técnicas irá auxiliar os serviços de saúde do SUS no diagnóstico e controle da TB no país.http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1413867023008814tuberculose pulmonar tuberculose extrapulmonar PCR em tempo real teste rápido molecular diagnóstico molecular |
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