Restauración en el Inmunoblotting de proteínas de Neisseria meningitidis dañadas por calor y agentes reductores
En este trabajo se utilizaron cinco detergentes para restaurar las proteínas de membrana externas (PME) del meningococo dañadas por el efecto del calor y de agentes reductores utilizados en el Inmunoblotting. La acción de los detergentes fue evaluada en la solución de lavado, en el diluente de la mu...
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| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Finlay Ediciones
2015-12-01
|
| Series: | VacciMonitor |
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| author | Rolando Ochoa Xenia Ferriol Ana García Juan Carlos Martínez Franklin Sotolongo |
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| collection | DOAJ |
| description | En este trabajo se utilizaron cinco detergentes para restaurar las proteínas de membrana externas (PME) del meningococo dañadas por el efecto del calor y de agentes reductores utilizados en el Inmunoblotting. La acción de los detergentes fue evaluada en la solución de lavado, en el diluente de la muestra y del conjugado. Las bandas de proteínas, reconocidas por la IgG del suero, fueron identificadas usando un conjugado anti IgG humana peroxidasa. Los antígenos reconocidos por el control positivo se corresponden con las proteínas P1, P3, P4 y P5 atendiendo a su peso molecular. Además, fueron reconocidas bandas de 80, 70, 24 kDa y otra con peso mayor a 150 kDa. En general el reconocimiento de todas las PME, excepto esta última de alto peso molecular (APM), se vieron favorecidas con la utilización del Tween 20, con el que se logró un incremento del número y la intensidad de las bandas así como la disminución de los fondos con respecto al resto de detergentes evaluados (Empigen BB, Triton X-100, Nonidet NP-40 y CHAPS). El reconocimiento de la proteína de APM (>150 kDa) se vio afectado por la presencia de detergente como el Tween 20 y Empigen BB. Los lavados con Tween 20
constituyeron los pasos más importantes en la renaturalización de los sitios de unión de la IgG a las PME |
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| institution | Directory Open Access Journal |
| issn | 1025-028X 1025-0298 |
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| publishDate | 2015-12-01 |
| publisher | Finlay Ediciones |
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| spelling | doaj.art-fda72eaee0b54f6abf45fda22bb731212022-12-21T19:53:19ZengFinlay EdicionesVacciMonitor1025-028X1025-02982015-12-019315Restauración en el Inmunoblotting de proteínas de Neisseria meningitidis dañadas por calor y agentes reductoresRolando Ochoa0Xenia Ferriol1Ana García2Juan Carlos Martínez3Franklin Sotolongo4Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, CubaEn este trabajo se utilizaron cinco detergentes para restaurar las proteínas de membrana externas (PME) del meningococo dañadas por el efecto del calor y de agentes reductores utilizados en el Inmunoblotting. La acción de los detergentes fue evaluada en la solución de lavado, en el diluente de la muestra y del conjugado. Las bandas de proteínas, reconocidas por la IgG del suero, fueron identificadas usando un conjugado anti IgG humana peroxidasa. Los antígenos reconocidos por el control positivo se corresponden con las proteínas P1, P3, P4 y P5 atendiendo a su peso molecular. Además, fueron reconocidas bandas de 80, 70, 24 kDa y otra con peso mayor a 150 kDa. En general el reconocimiento de todas las PME, excepto esta última de alto peso molecular (APM), se vieron favorecidas con la utilización del Tween 20, con el que se logró un incremento del número y la intensidad de las bandas así como la disminución de los fondos con respecto al resto de detergentes evaluados (Empigen BB, Triton X-100, Nonidet NP-40 y CHAPS). El reconocimiento de la proteína de APM (>150 kDa) se vio afectado por la presencia de detergente como el Tween 20 y Empigen BB. Los lavados con Tween 20 constituyeron los pasos más importantes en la renaturalización de los sitios de unión de la IgG a las PMEhttp://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2000000300004&lng=es&nrm=iso&tlng=esInmunoblottingNeisseria meningitidisdetergentesproteínas de membrana externarenaturalizaciónproteínas desnaturalizadas |
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