Evaluación de dos métodos de extracción de ADN a partir de biopsias fijadas en formalina y embebidas en parafina en condiciones no optimas
Los tejidos de archivo son un material de incalculable valor para estudios retrospectivos que requieran la aplicación de análisis moleculares. Existen múltiples métodos de extracción de ADN a partir de este tipo de muestras. No obstante, la mayoría de métodos toman mucho tiempo y los reactivos emple...
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| Published: |
Universidad Nacional de Colombia
2011-05-01
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| Series: | Acta Biológica Colombiana |
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| Online Access: | https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/18864 |
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| author | Javier Andres Bustamante Miryam Astudillo Alvaro Jairo Pazos Moncayo Luis Eduardo Bravo |
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| description | Los tejidos de archivo son un material de incalculable valor para estudios retrospectivos que requieran la aplicación de análisis moleculares. Existen múltiples métodos de extracción de ADN a partir de este tipo de muestras. No obstante, la mayoría de métodos toman mucho tiempo y los reactivos empleados contribuyen a la fragmentación del ADN. Con el objetivo de optimizar dos métodos de extracción de ADN a partir de tejidos embebidos en parafina en condiciones no optimas. Se seleccionaron 47 bloques en parafina que contenían biopsias de pleura, pulmón y pericardio correspondientes a 24 pacientes (66,66%hombres) mayores de 18 años, con inflamación granulomatosa crónica, remitidos al Departamento de Patología del Hospital Universitario del Valle entre 2002-2007. A cada muestra se le realizaron 10 cortes y se sometieron a dos métodos de extracción de ADN: 1.Convencional y 2.QIAamp-DNA mini kit®. La eficiencia del ADN fue valorada por espectrofotometría y amplificación del gen GAPDH. La concentración de ADN de las muestras extraídas por el método convencional fue de 65.52ng/µl ±11.47 (promedio±EE) y la relación 260/280 vario entre 0.52 y 2.30. De las muestras extraídas por el método comercial, la concentración media de ADN fue 60.89ng/µl±6.02, con una absorbancia que oscilo entre 0 y 2.64. El ADN obtenido fue sometido a PCR, de 47 muestras extraídas por ambos métodos, 25 y 23 respectivamente amplificarón exitosamente el gen GAPDH. Los métodos usados para la obtención de ADN presentaron un desempeño similar, revelando así su potencial utilidad en estudios retrospectivos a partir de biopsias embebidas en parafina en condiciones inadecuadas. |
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| spelling | doaj.art-ff4802c1917c46c2958c63ee722df0ae2022-12-21T20:12:25ZengUniversidad Nacional de ColombiaActa Biológica Colombiana0120-548X1900-16492011-05-0116219247Evaluación de dos métodos de extracción de ADN a partir de biopsias fijadas en formalina y embebidas en parafina en condiciones no optimasJavier Andres Bustamante0Miryam Astudillo1Alvaro Jairo Pazos Moncayo2Luis Eduardo Bravo3Estudiante de maestria en Ciencias Biomedicas Universidad del ValleProfesora titular, Departamento de patología, Universidad del ValleDocente Departamento de Biología, Universidad de NariñoProfesor emerito, Departamento de patologia, Universidad del ValleLos tejidos de archivo son un material de incalculable valor para estudios retrospectivos que requieran la aplicación de análisis moleculares. Existen múltiples métodos de extracción de ADN a partir de este tipo de muestras. No obstante, la mayoría de métodos toman mucho tiempo y los reactivos empleados contribuyen a la fragmentación del ADN. Con el objetivo de optimizar dos métodos de extracción de ADN a partir de tejidos embebidos en parafina en condiciones no optimas. Se seleccionaron 47 bloques en parafina que contenían biopsias de pleura, pulmón y pericardio correspondientes a 24 pacientes (66,66%hombres) mayores de 18 años, con inflamación granulomatosa crónica, remitidos al Departamento de Patología del Hospital Universitario del Valle entre 2002-2007. A cada muestra se le realizaron 10 cortes y se sometieron a dos métodos de extracción de ADN: 1.Convencional y 2.QIAamp-DNA mini kit®. La eficiencia del ADN fue valorada por espectrofotometría y amplificación del gen GAPDH. La concentración de ADN de las muestras extraídas por el método convencional fue de 65.52ng/µl ±11.47 (promedio±EE) y la relación 260/280 vario entre 0.52 y 2.30. De las muestras extraídas por el método comercial, la concentración media de ADN fue 60.89ng/µl±6.02, con una absorbancia que oscilo entre 0 y 2.64. El ADN obtenido fue sometido a PCR, de 47 muestras extraídas por ambos métodos, 25 y 23 respectivamente amplificarón exitosamente el gen GAPDH. Los métodos usados para la obtención de ADN presentaron un desempeño similar, revelando así su potencial utilidad en estudios retrospectivos a partir de biopsias embebidas en parafina en condiciones inadecuadas.https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/18864biopsiagranulomaácidos nucleicosfragmentación del ADNreacción en cadena de la polimerasa |
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