| Summary: | INTISARI
Sudjadi. 2004. Pemurnian Ribosome Inactivating Protein (RIP) Biji Annona squamosa L. Dengan Kolom CM-Sepharose CL-6B. Biologi 3 (3): 181 -190.
Hasil penelitian terdahulu menunjukkan bahwa ekstrak gubal biji Annona squamosa L. mempunyai aktivitas memotong DNA superkoil, aktivitas RNA N-glikosidase dan jugabersifat sitotoksik terhadap sel, yang menunjukkan keberadaan Ribosome Inactivating Protein (RIP). Pada penelitian tersebut masih menggunakan protein total, sehingga aktivitas yang ditunjukkan itu diduga merupakan gabungan dari aktivitas beberapa protein yang terdapat dalam biji. Oleh karena itu tujuan penelitian ini adalah untuk memumikan RIP dari biji Asquamosa dan menentukan aktivitasnya.
Ekstrak gubal biji A squamosa dibuat dengan menggerus biji menggunakan bufer natrium fosfat 5 mM pH 7,2 yang mengandung natrium klorida 0,14M. Larutan protein total diperoleh dengan mengendapkan protein dalam ekstrak gubal dengan amonium sulfat 100% jenuh dan kemudian didialisis dalam bufer natrium fosfat pH 6.5. Larutan protein ini kemudian dipisahkan menggunakan kolom CM-Sepharose CL-6B dengan eluen bufer natrium fosfat 5 mM pH 6,5 dan dilanjutkan dengan elusi bergradien natrium klorida 0,0 - 0,5M dalam bufer fosfat Fraksi diuji kemampuannya memotong DNA superkoil pUC19. Identifikasi kemurnian dilakukan dengan elektroforesis gel poliakrilamid-SDS.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa fraksi protein biji A.squamosa yang dipisahkan dengan kolom CM Sepharose CL-6B pada elusi natrium klorida 0,2 dan 0,3 M menunjukkan aktivitas memotong DNA superkoil. Analisis ukuran molekul dengan SDS-PAGE menunjukkan bahwa RIP tersebut berukuran 28,6 kDa dan 37 kDa. Dari data tersebut dapat disimpulkan bahwa biji A.squamosa L mengandung dua macam RIP.
Kata kunci: RIP, biji, Annona squamosa, CM-Sepharose CL-6B
|
|---|