Desenvolvimento de uma metodologia de pcr semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gb de citomegalovírus
A infecção por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa...
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|---|---|
| Formato: | Artigo |
| Idioma: | Portuguese |
| Publicado: |
Universidade de São Paulo
2002-03-01
|
| Series: | Medicina |
| Subjects: | |
| Acceso en liña: | http://www.revistas.usp.br/rmrp/article/view/799 |
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| author | Lauro J. Marin Aldo A. Cunha Victor H. Aquino Luiz T. M. Figueiredo |
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| description | A infecção por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente,que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulação de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronização, podendo ser testada na detecção da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose. |
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| publisher | Universidade de São Paulo |
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| spelling | doaj.art-6d7af3c2e6494e69b28fc3e56db819822022-12-22T03:18:36ZporUniversidade de São PauloMedicina0076-60462176-72622002-03-0135110.11606/issn.2176-7262.v35i1p85-94Desenvolvimento de uma metodologia de pcr semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gb de citomegalovírusLauro J. Marin0Aldo A. Cunha1Victor H. Aquino2Luiz T. M. Figueiredo3Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo (FMRP/USP)Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo - FMRP/USPFaculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo (FMRP/USP)Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo - FMRP/USPA infecção por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente,que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulação de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronização, podendo ser testada na detecção da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose.http://www.revistas.usp.br/rmrp/article/view/799Citomegalovírus. CargaViral. Reação em Cadeia por Polimerase. |
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