融合蛋白TAT-RabGEF1原核表达载体的构建及蛋白表达
： 【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体，在E.coli Rosetta（DE3）菌株中高效表达并纯化融合 蛋白，研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板，设计上游和下游 含有限制性酶切位点和TAT序列的引物，PCR扩增目的片段TAT-RabGEF1，并通过双酶切构建PET28a-TAT-Rab? GEF1重组质粒载体，在E.coli Rosetta（DE3）大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，产物用亲和层析柱纯化后测量浓度及 鉴定。CCK-8检测融合蛋白的细胞毒性，并用荧光显微镜及荧光分光光度计定性定量观察其对小鼠肥...
| Main Authors: | , , |
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| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2018-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43569194/ |